不同代次诱导多能干细胞增殖及牙周定向分化的能力

• 作者: 李静文 栾庆先 殷晓晖
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 多能干细胞 细胞代次 牙周定向分化 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 16-24
• 页数: 9页
• 分类号: R781.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2017.01.003

摘要

目的:研究不同代次诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)在增殖及向牙周定向分化能力上的区别,为今后深入研究和可能的临床应用提供理论基础.方法:复苏不同代次(P5、P10、P15、P20)人牙龈成纤维细胞来源的iPSCs,观察细胞形态并比较其增殖能力,进一步将各代次细胞形成拟胚体,于含生长分化因子-5(growth/differentiation factor-5,GDF-5)的培养基中诱导分化14 d,同时分别设置未诱导自发分化组为阴性对照,茜素红染色观察矿化结节并半定量分析钙盐沉积量,qRT-PCR及免疫荧光染色分别检测牙周相关基因及蛋白的表达,评价各代次间分化能力的差异.结果:不同代次的iPSCs均具有很强的体外增殖能力,经牙周定向诱导的细胞呈成纤维细胞样生长,茜素红染色可形成“矿化”结节,细胞钙盐沉积量较自发分化组显著增高且差异有统计学意义(P5:t =2.125,P=0.003;P10:t =2.246,P=0.021;P15:t =3.754,P=0.004;P20:t=3.933,P=0.002),但相同诱导条件下不同代次间钙盐沉积量差异无统计学意义(牙周定向诱导组:F =2.365,P=0.109;自发分化对照组:F =2.901,P=0.067),此外,相同代次细胞中诱导组牙周相关标记物的表达均高于对照组且差异有统计学意义(P＜0.05),但不同代次间的蛋白表达差异无统计学意义(骨涎蛋白:F =0.9267,P=0.450;波形蛋白:F=0.9171,P =0.455;牙骨质蛋白1:F =2.129,P=0.137).结论:不同代次不会影响iPSCs的增殖及分化能力,体外长期培养的iPSCs易于扩增,较高代次者经诱导仍可高效定向分化,适合作为牙周组织工程的种子细胞.