Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸

• 作者: 刘义 堵国成 朱龙宝 李婉珍 葛飞 陶玉贵
• 来源期刊: 高等学校化学学报
• 学科: 化学
• 关键词: 苯丙氨酸变位酶 β-芳香丙氨酸 基因克隆 异源表达
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 有机化学
• 页码范围: 206-211
• 页数: 6页
• 分类号: O629
• 字数: 4082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7503/cjcu20160624

摘要

克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(SmPAM)基因,并进行异源表达,制备了重组SmPAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码SmPAM的结构基因pam,与表达载体pET28a连接,构建重组表达质粒pET28a-pam,转入E.coli BL21中表达,采用亲和层析柱分离纯化重组酶SmPAM.结果表明,克隆得到编码523个氨基酸长度的SmPAM基因pam,并在大肠杆菌中实现了高效表达,制得电泳纯的重组SmPAM.该酶在最适温度30℃,pH=9.0条件下活力达到2.5 U/mg,具有较高的热稳定性和pH稳定性,在60~70℃下保持3 h未见活性下降,在pH=9~11保持24 h,残余酶活力达到98%.SmPAM具有较宽的底物谱,可催化苯环上携带不同基团的3-芳香丙烯酸合成β-芳香丙氨酸,当苯环上携带吸电子基团时催化反应更易完成,其中2-硝基-β-苯丙氨酸的产率最高,达到93%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶玉贵	安徽工程大学生物与化学工程学院	107	366	9.0	13.0
2	堵国成	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	339	3648	30.0	42.0
3	李婉珍	安徽工程大学生物与化学工程学院	36	85	5.0	7.0
4	葛飞	安徽工程大学生物与化学工程学院	65	207	7.0	10.0
5	朱龙宝	安徽工程大学生物与化学工程学院	43	147	6.0	10.0
6	刘义	西华大学食品与生物工程学院	11	33	3.0	5.0