与人巨细胞病毒UL132编码蛋白相互作用蛋白的初步筛选和鉴定

• 作者: 吴思 孙峥嵘 王爽 邹飞
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人巨细胞病毒 UL132蛋白 酵母双杂交系统 人胎脑cDNA文库
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 690-693,前插1
• 页数: 5页
• 分类号: Q81
• 字数: 3070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20170405

摘要

目的:探讨应用酵母双杂交系统筛选出与人巨细胞病毒(HCMV)UL132编码蛋白相互作用的人胎脑cDNA文库组织蛋白,阐明其在先天性巨细胞病毒感染中可能的致病机制.方法:采用聚合酶链式反应扩增HCMV UL132片段,酶切、纯化扩增的目的片段及酵母诱饵表达载体pGBKT7,连接HCMV UL132片段到载体pGBKT7上,将连接后的重组体pGBKT7-UL132转化到酵母菌AH109中,再将人胎脑文库DNA也转化到酵母AH109中,筛选与HCMV UL132编码蛋白相互作用的人胎脑文库蛋白,并对阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果:成功构建诱饵表达载体pGBKT7-UL132,双酶切鉴定可见800及7 500 bp 2条目的条带;转化文库质粒后计算转化效率为6.6×103 cfu· μg-1,显色反应显示有95个菌落呈蓝色,最终确认10个克隆与HCMV UL132编码蛋白相互作用,Blast结果显示7个克隆与CAML高度同源.结论:利用酵母双杂交系统成功筛选出与HCMV UL132编码蛋白相互作用的人胎脑cDNA文库蛋白CAML,推测该目的蛋白可能在HCMV感染所致神经系统损伤、病毒的入侵和增殖过程中发挥重要作用.