猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

• 作者: 于海 周艳君 姜一峰 张文超 李先斌 李慧春 杨德强 王康 童光志 虞凌雪 陈鹏飞 高飞 黄勤峰
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 杆状病毒 Sf9细胞
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3363字
• 语种: 中文

摘要

本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体pFastBacHTA中,获得了重组质粒pFastBacHTA-S1,将该重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒rBacmid-S1,再将重组穿梭质粒rBacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变.将收获的rBac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析.结果显示,P3代重组病毒rBac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 kDa左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别.综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础.