一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略

• 作者: 任红艳 刘西梅 华文君 周黎 杨烨 欧阳艳 毕延震 綦世金 陈建武
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因打靶 CRISPR/Cas9 同源重组 肌抑素
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 58-63
• 分类号: Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170109

摘要

同源重组介导的基因打靶技术因其准确性高、引入的突变可以预测,已经成为功能基因组研究的重要工具.但是在真核生物体内,天然同源重组的概率极低,对后续的筛选和鉴别造成很大困扰.因此,建立一个广谱性的高效筛选策略极为重要.研究基于“双荧光”的可视化筛选,通过提高筛选效率,从而建立了一种显著提高同源重组打靶效率的新策略.该策略以绿色荧光蛋白基因和新霉素基因为正筛选标记,以红色荧光蛋白基因为负筛选标记.经过G418筛选后,挑取仅表达绿色荧光蛋白的抗性克隆,用于跨界PCR检测.研究尝试运用上述新策略,借助CRISPR/Cas9技术,对猪肌抑素基因进行同源重组介导的基因打靶.在选取的T1和T2两个靶位点处,“双荧光”策略筛选的细胞阳性率分别达到80.5％和86.7％,筛选效率得到显著提高.研究建立的“双荧光”可视化筛选策略具有高效性和广谱性,在动物基因编辑领域具有广阔的应用前景.