抗黄曲霉毒素合成中关键蛋白AFLP(OmtA)的单克隆抗体制备与鉴定

• 作者: 张兆威 张奇 张文 李培武 王婷
• 来源期刊: 中国油料作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄曲霉毒素 AFLP 单克隆抗体 制备与鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 测试与加工
• 页码范围: 551-555
• 页数: 5页
• 分类号: S379.7
• 字数: 4496字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7505/j.issn.1007-9084.2017.04.018

摘要

AFLP (OmtA)蛋白是黄曲霉毒素合成晚期的关键酶.用大肠杆菌表达的重组SUMO-AFLP融合蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,选取小鼠阳性血清的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选,筛选出可以稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的杂交瘤细胞株.再用阳性细胞株制备腹水抗体,经辛酸-硫酸铵纯化抗体后,用间接ELISA、Western杂交等方法对抗体的特性进行鉴定.筛选出1株能稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的细胞株3B4 3B10,亚类鉴定单抗为IgG2a.间接ELISA法测定该细胞腹水抗体的效价为1∶256 000,Westem杂交结果显示抗AFLP单克隆抗体能特异性识别AFLP重组蛋白及黄曲霉菌内的天然AFLP蛋白.用1μg·mL-1单克隆抗体检测AFLP蛋白,其线性检测范围为1.259 ～ 57.335ng· mL-1,检测限为0.851ng·mL-1,R2 =0.998 3.本文成功制备抗黄曲霉毒素合成中天然AFLP蛋白的单克隆抗体,特异性和灵敏度均较高,为进一步研究AFLP的表达及功能机制奠定了基础.