His159突变对嗜热革节孢EGⅡ活性及热稳定性的影响

• 作者: 刘宁 刘玉姣 李多川 王欢 高金鹏
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 内切葡聚糖酶 定点突变 动力学参数 释放效率
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1851-1859
• 页数: 9页
• 分类号: S188
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.11.012

摘要

嗜热革节孢(Scytalidium thermophilum)内切葡聚糖酶Ⅱ(endoglucanaseⅡ,EGⅡ)的第159位组氨酸(Hisl59)在糖苷水解酶第五家族中是高度保守的,但其在酶催化中的作用尚不清楚.本研究将His159分别突变为丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、色氨酸和酪氨酸,突变酶H159A、H159D、H159F、H159R、H159W和H159Y与原始酶(wild type,WT)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达,经亲和层析纯化后进行特性分析.结果表明,6个突变酶的米氏常数(Km)均高于WT,突变酶H159D、H159F、H159R、H159W和H159Y的催化常数(kcat)降低,但H159A的kcat有显著提高(P＜0.05).WT的最适反应温度为70℃,突变酶H159A、H159D和H159F最适温度为60℃,H159R、H159W和H159Y最适温度为55℃.突变酶H159A在60℃10 min处理后有80％以上的活性,突变酶H159D和H159W的热稳定性明显下降,突变酶H159F、H159R和H159Y在60℃处理10 min几乎丧失全部活性.上述研究结果表明,159位的组氨酸与酶的活性和热稳定性有密切关系.本研究在前人研究的基础上,对保守位点His159进行定点突变和性质测定与比较,获得了更具体的数据,进一步分析H159氨基酸影响酶活性的分子与结构机制,为下一步的纤维素酶的分子改造提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘宁	山东农业大学植物保护学院	42	545	12.0	22.0
2	李多川	山东农业大学植物保护学院	73	827	17.0	23.0
3	王欢	山东农业大学植物保护学院	8	22	3.0	4.0
4	高金鹏	山东农业大学植物保护学院	3	7	2.0	2.0
5	刘玉姣	山东农业大学植物保护学院	3	6	2.0	2.0