碱胁迫应答基因GsARHP的克隆及转基因紫花苜蓿的耐碱性分析

• 作者: 丁晓东 宋雪薇 朱娉慧 朱延明 李佶娜 李强 王子君 贾博为 陈冉冉
• 来源期刊: 草业学报
• 关键词: 野生大豆 GsARHP基因 碱胁迫 紫花苜蓿 遗传转化
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 92-103
• 页数: 12页
• 字数: 7677字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11686/cyxb2016464

摘要

本研究基于实验室前期野生大豆碱胁迫转录组数据,筛选出一个碱胁迫下上调表达的假定蛋白基因,暂命名为GsARHP(alkali stress related hypothetical protein gene).首先利用Real-time PCR方法验证了GsARHP基因受碱胁迫诱导表达.生物信息学分析表明,该基因编码一个含有130个氨基酸的亲水蛋白,含有信号肽但无跨膜结构域;构建了GsARHP植物超量表达载体,利用农杆菌介导的子叶节侵染法转化肇东紫花苜蓿,通过PCR,Southern Blot和RT-PCR方法检测获得了3个超量表达GsARHP基因的转基因株系,并对其耐碱性进行了分析.结果表明,在0,100和150 mmol/L NaHCO3处理14 d后,非转基因株系明显萎蔫、黄化甚至死亡,而转基因株系则长势良好;进一步分析其生理指标显示,相对质膜透性与丙二醛含量均显著低于非转基因株系(P＜0.01),而叶绿素含量与CAT活性显著高于非转基因株系(P＜o.01),说明GsARHP基因的超量表达可以增强紫花苜蓿的耐碱能力.