细胞毒性T细胞抗原4胞外结构域的高效表达与纯化

• 作者: 丰慧根 刘青 原志庆 林俊堂 樊晋宇 郭鑫鑫
• 来源期刊: 河南师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CTLA4 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 生态与环境微生物学研究专题
• 页码范围: 115-120
• 页数: 6页
• 分类号: Q81
• 语种: 中文
• DOI: 10.16366/j.cnki.1000-2367.2017.05.019

摘要

目的:获得细胞毒性T淋巴细胞相关分子4胞外结构域(exCTLA4)在大肠杆菌中高效表达的条件,并纯化获得高纯度的重组蛋白.方法:构建原核表达质粒pET28a-exCTLA4并转入大肠杆菌Transetta (DE3)中,通过改变诱导物IPTG浓度、细菌培养温度和时间,获得了exCTLA4的最佳表达条件.收集最佳诱导条件下表达exCTLA4的菌体,将菌体超声破碎后,离心分离exCTLA4包涵体,用低浓度尿素(2 mol·L-1)洗去大部分背景蛋白后,再用高浓度尿素(8 mol·L-1)溶解包涵体,进一步用镍离子亲和层析方法得到高纯度exCTLA4.结果:构建了表达载体pET28a-exCTLA4,获得了exCTLA4在Transetta (DE3)中的最佳诱导条件,即在1 mmol·L-1 IPTG、25℃下,诱导6h能得到最佳表达,但重组蛋白以包涵体形式存在.通过纯化exCTLA4包涵体及进一步的镍离子亲和层析获得了高纯度的目的蛋白,Western blot鉴定为CTLA4.结论:获得了exCTLA4重组蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件和纯化方法及步骤,为该蛋白的应用奠定了基础.