人Six1基因促进肺腺癌细胞A549的增殖

• 作者: 叶棋浓 尤文叶 崔越 晋帅 李玲 洪甜 王钰琦 陈思禹 韩笑 黄俊
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人Six1基因 慢病毒表达载体 生物学功能
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 96-100,127
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q25
• 字数: 3989字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.02.005

摘要

目的:构建带有Flag标签的Sixl基因的慢病毒表达载体,并对表达产物Flag-Six1的生物学功能进行初步鉴定.方法:以实验室构建的真核表达载体myc-Six1为模板,根据实验需求合成引物,经PCR扩增,酶切后插入pCDH-Flag载体,Western印迹检测其在人293T细胞中的表达;经Western印迹鉴定无误后,与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染人肺癌细胞A549,经嘌呤霉素筛选2周,收集部分细胞,用Western印迹验证蛋白水平的表达,并通过细胞生长实验检测Six1对A549细胞生长的影响;提取RNA,通过qRT-PCR检测细胞中血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)在mRNA水平的变化.结果:构建的慢病毒表达载体pCDH-Flag-Six1能够在293T细胞中正确表达;包装成慢病毒,感染肺癌细胞A549后可正常表达;生长曲线表明Flag-Six1可促进人肺癌细胞A549的繁殖;qRT-PCR结果表明Six1可升高肺癌细胞A549的VEGF-C转录水平.结论:构建了带pCDH-Flag标签的人Six1基因慢病毒表达载体,Flag-Six1能够在肺癌细胞系A549中表达,并能促进细胞增殖,这为进一步研究Six1的生物学功能奠定了重要基础.