肝癌组织HNF4αmRNA定量检测方法的建立与初步应用

• 作者: 孔慧芳 张伟 张百龙 毛威 荣义辉 董政 高旭东
• 来源期刊: 实用肝脏病杂志
• 关键词: 肝细胞癌 肝细胞核因子4α 逆转录荧光定量PCR法
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 原发性肝癌
• 页码范围: 302-306
• 页数: 5页
• 字数: 4397字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5069.2017.03.012

摘要

目的 建立一种定量检测肝细胞癌(HCC)组织肝细胞核因子4α(HNF4α)mRNA的方法.方法 取手术获得的HCC组织16例,提取总RNA,逆转录PCR扩增获得全长HNF4αmRNA对应cDNA产物,经TA克隆后,测序确认.根据获得序列,设计检测HNF4αmRNA引物及MGB荧光探针.以体外转录HNF4αmRNA为标准品,建立一步法逆转录荧光定量PCR检测方法,同时设定β-actin mRNA为内参对照,最终计算得到组织HNF4αmRNA水平.采用免疫组化染色检测HNF4α蛋白表达,比较HNF4αmRNA水平与HNF4α蛋白表达的对应结果.结果 HCC组织HNF4αmRNA定量标准曲线斜率为-3.237,相关系数r值达0.994,β-actin mRNA定量标准曲线斜率为-3.037,相关系数r值为0.996,表明建立的方法可用于检测HNF4αmRNA定量(V-4α值),16例HCC组织HNF4αmRNA与HNF4α 蛋白表达结果呈一致性对应关系.结论 我们初步成功建立了定量检测HCC组织HNF4αmRNA水平方法,其意义还需要进一步研究.