合成8二甲基异戊烯基柚皮素的人工酿酒酵母菌株构建

• 作者: 元英进 刘夺 刘宏 姚明东 李博 梁楠 王颖 肖文海
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 8二甲基异戊烯基柚皮素 合成生物学 酿酒酵母 异源表达 蛋白质截断
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 71-81
• 页数: 11页
• 分类号: Q815
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170910

摘要

8二甲基异戊烯基柚皮素(8DN)作为生产黄酮类药物淫羊藿苷的重要前体,在医药合成领域具有重大应用潜力.由于其合成路径及相关基因的复杂性,目前主要通过饲喂8DN的直接前体(柚皮素、异黄腐酚等)的方式合成8DN,而在生物体内全合成8DN的研究工作还未见报道.为了实现8DN在酿酒酵母体内的生物全合成,通过组合筛选8DN前体物柚皮素合成所需的多种外源基因(TAL、4CL、CHS、CHI),获得30株柚皮素生产菌,发现不同来源的基因组合使柚皮素产量的具有明显差异(0.37 ～ 22.33mg/L).并且利用Delta位点将较优的基因组合整合至酵母基因组,实现了稳定的柚皮素高产菌株(SyBE_Sc02050031)构建.在此基础上进一步导入带有苦参来源的异戊烯基转移酶基因(N8DT)多拷贝质粒,实现8DN合成的完整反应过程,8DN的摇瓶发酵产量达到36.7 μg/L.另外,通过关键限速酶N8DT的序列优化策略,发现截断定位信号肽序列的N8DT明显提高了从柚皮素到8DN这一关键反应的催化效果,8DN的产量提高到52.6μg/L(144.2％).首次在酿酒酵母中成功构建高产8DN的生物全合成路径,为在微生物体内合成其他黄酮类天然产物提供了参考,具有重要的指导意义.