S6K1 C端自抑制假底物结构域磷酸化与Akt去磷酸化协同调节SP600125诱导巨核细胞系多倍体化

• 作者: 于颖 张路遥 杨金刚 王丽丽 谢晓冬 赵松 邢思宁 马东初
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 核糖体蛋白S6激酶1(S6K1) Akt 巨核细胞 多倍体化
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 233-241
• 页数: 9页
• 分类号: Q25
• 字数: 5351字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.002

摘要

目的:探讨JNK抑制剂SP600125诱导巨核细胞白血病系多倍体化的调控机制.方法:用SP600125和3种抑制剂(PD184352、U0126和LY294002)处理Dami和CMK细胞,用点突变技术对核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)C端自抑制假底物结构域和疏水基序突变构建的S6K1质粒转染细胞,流式细胞术分析细胞的DNA倍性,Western印迹检测S6K1、MAPK和Akt蛋白的表达及磷酸化修饰位点的变化.结果:当单独使用3种抑制剂时,对Dami和CMK细胞的倍性无影响.当SP600125与3种抑制剂联合时,尽管PD184352下调了p44/42 MAPK在Thr202/Tyr204位点的磷酸化,但其并不抑制SP600125诱导的Dami和CMK细胞的多倍体化;相反,U0126抑制SP600125诱导的Dami和CMK细胞的多倍体化,但并不下调p44/42 MAPK的磷酸化;而LY294002增加Akt的磷酸化,并阻断SP600125诱导的Dami和CMK细胞的多倍体化.这3种抑制剂均在SP600125诱导的多倍体Dami和CMK细胞中部分抑制S6K1的Thr421/Ser424磷酸化,但并不增加S6K1的Thr389磷酸化.转染S6K1突变质粒的Dami细胞,并没有对SP600125诱导的多倍体化产生影响,同时,无论是模拟磷酸化或去磷酸化的Thr389突变均对SP600125诱导的多倍体化无影响,且未显现出与LY294002的协同作用.C端自抑制假底物结构域突变质粒(S6K1-D3E)可以进一步阻断SP600125诱导的已经被LY294002部分阻断的Dami细胞多倍体化.结论:S6K1的C端自抑制假底物结构域磷酸化与Akt去磷酸化协同调节SP600125诱导巨核细胞白血病系的多倍体化.