采用CDR3亲和力转移方法快速获得抗FSHR抗体

• 作者: 席欧彦 李江伟 秦瑞坪 赵婷 邱玲玲 马晓玲
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 亲和力转移 FSHR FSH33-53 cAbBCII10 纳米抗体
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 页码范围: 1298-1304
• 页数: 7页
• 分类号: S188
• 字数: 4060字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2017.07.016

摘要

[目的]评价骆驼来源的纳米抗体cAbBCII10作为非抗体亲和力转移骨架的潜能,采用亲和力转移的方法,将FSHR结合肽段移植到cAbBCII10的抗原结合区以快速获得抗FSHR抗体.[方法]将FSHR结合肽FSH33-53编码序列,分别移植入纳米抗体cAbBCII10的CDR1和CDR3区域中,命名为VHH-hFSH1 和VHH-hFSH3.采用DNA合成方法获得VHH-hFSH1,VHH-hFSH3和cAbBCII10的DNA编码序列,把这些DNA序列克隆到pET22b载体上,将其转化到BL21(DE3)感受态细胞中.经过诱导和表达再用Ni离子亲和纯化获得纯的单域抗体.采取ELISA方法鉴定纯化的cAbBCII10,VHH-hFSH1、VHH-hFSH3与FSHR的结合能力及特异性.[结果]通过框架移植获得的VHH-hFSH1 ,VHH-hFSH3和cAbBCII10蛋白均在细菌胞间质可溶性表达.将FSHR结合肽FSH33-53移植到cAbBCII10的CDR3获得的VHH-hFSH3具有特异结合FSHR活性.[结论]cAbBCII10可以作为移植的框架,FSH和FSHR结合肽段移植到cAbBCII10的CDR1和CDR3区可以获得亲和性较高的抗FSHR抗体.