定点突变法构建人尼古丁受体α5亚单位突变体(Asn398)慢病毒表达载体

• 作者: 何桦 彭芳 李裕军 赵子文 赵祝香
• 来源期刊: 广州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 尼古丁受体 定点突变 慢病毒 突变
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R563|R593.28
• 字数: 3054字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j2017.02.02

摘要

目的:克隆人尼古丁受体α5亚单位(CHRNA5),以野生型CHRNA5为模板,通过定点突变法构建CHRNA5突变体(Asn398)慢病毒真核表达载体,为Asn398功能研究提供基础.方法:RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,运用重叠延伸PCR法进行定点突变,定向克隆至EX-Q0146-LV201,序列分析鉴定野生及突变重组子,将CHRNA5突变体Asn398及未突变体定向克隆到EX-Q0146-LV201慢病病毒表达质粒上.并转染至HEK293T细胞中,RT-PCR检CHRNA5 mRNA表达,Westernblot检测其蛋白表达.结果:重组子目的基因的序列分析结果显示成功克隆CHRNA5 cDNA基因,并成功将CHRNA5第398位氨基酸天冬氨酸(Asp)转变为天冬酰胺(Asn),突变体及未突变在转染细胞中均获得CHRNA5 mRNA及蛋白表达.结论:成功构建CHRNA5突变体Asn398慢病毒表达载体,证实其在293细胞中有mRNA转录及其蛋白表达,为下一步进行功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何桦	广州市第一人民医院呼吸内科	10	77	2.0	8.0
2	赵子文	广州市第一人民医院呼吸内科	77	564	13.0	20.0
3	赵祝香	广州市第一人民医院呼吸内科	15	97	8.0	9.0
4	彭芳	广州医科大学附属第三医院呼吸内科	9	15	2.0	3.0
5	李裕军	广州市第一人民医院呼吸内科	4	11	1.0	3.0