粪便微生物宏基因组来源的热稳定性邻苯二酚1,2-双加氧酶异源表达及酶学性质

• 作者: 丁俊美 吴倩 周峻沛 唐湘华 慕跃林 戴利铭 李俊俊 杨正凤 沈骥冬 许波 邓梦 韩楠玉 黄遵锡
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 邻苯二酚1,2-双加氧酶 粪便微生物宏基因组 异源表达 热稳定性
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 微生物功能基因组研究
• 页码范围: 1947-1957
• 页数: 11页
• 字数: 6649字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160789

摘要

[目的]克隆倭蜂猴粪便微生物宏基因组的邻苯二酚1,2-双加氧酶基因ca tPL Cgl,并对该酶进行异源表达及酶学特性研究.[方法]利用宏基因组高通量测序技术获得catPLCgl,并对其氨基酸序列进行分析.将catPLCgl重组到载体pEASY-E2中并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,研究其酶学性质.[结果]catPLCgl全长852 bp,G+C含量48％,编码283个氨基酸,理论分子量为33.56 kDo重组CatPLCgl酶学性质分析显示最适作用pH为7.0,其中在pH 7.0-10.0范围内处理lh后,酶活剩余90％以上;最适作用温度为40℃,在25℃和40℃条件下稳定性较好,耐受210 h酶活性几乎不变.重组酶在最适条件下的动力学参数Km、Vmax和Kcat分别为24.9μmol/L、8.3 mmol/(min·g)和13.7 s-1;Fe2+、Hg2+、Cu2+、Triton X-100、SDS、Ag+强烈抑制该酶活性,而其它金属离子及有机试剂影响较小.[结论]从倭蜂猴粪便微生物宏基因组中克隆得到邻苯二酚l,2-双加氧酶基因catPLCgl,并对重组CatPLCgl酶学性质进行研究,该酶具有较好的热稳定性和耐碱性,在降解环境中的邻苯二酚和生产顺,顺-己二烯二酸方面具有应用潜力.