甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法的建立

• 作者: 吴伟怀 易克贤 李锐 杨先锋 杨旭光 梁艳琼 汪涵 贺春萍 郑金龙 黄兴
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蔗褐锈病 黑顶柄锈菌 巢式PCR分子检测
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 作物病虫害及其防治
• 页码范围: 2334-2339
• 页数: 6页
• 分类号: S435.661
• 字数: 4627字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.12.021

摘要

为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/R.通过对同寄主不同病原菌、以及不同属的锈菌DNA进行PCR检测以验证引物的特异性.结果表明,在优化的单一PCR反应体系与程序条件下,2对引物均仅能从甘蔗黑顶柄锈菌中扩增出约474 bp和363 bp的特异条带,而从其它真菌DNA中均扩增不出任何条带.进一步将引物PM2F/R作为第一轮扩增引物、PM3F/R作为第二轮扩增引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.001 ng/μL,较常规PCR提高100倍.由此表明,依据本研究所设计的2对引物而建立的快速、灵敏、准确的甘蔗黑顶柄锈菌的检测技术,对病原菌的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义.