微RNA-758/星形细胞上调基因1信号通路调控肝癌细胞转移的分子机制

• 作者: 吕俊生 孙玉 尹甜 崔石昌 张洪海 张雯雯 扈彩霞 李聪 王勋 王宏光 生守鹏 郑加生 龙江
• 来源期刊: 中华肝胆外科杂志
• 关键词: 微RNA,miR-758 星形细胞上调基因-1 肝癌 肿瘤转移
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 689-693
• 页数: 5页
• 字数: 3931字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-8118.2017.10.011

摘要

目的 探讨微RNA(miR)-758对肝癌细胞转移的影响及其作用机制,研究miR-758对促癌基因星形细胞上调基因1(AEG-1)的调控作用.方法 用miR-758瞬时转染HepG2细胞,通过Transwell迁移和侵袭实验,观察miR-758对肿瘤细胞转移的影响.利用CCK8法检测细胞增殖活性,观察miR-758对肿瘤细胞增殖的影响.使用流式细胞仪定量分析细胞周期,观察miR-758对细胞周期的影响.通过上皮间充质转化(EMT)实验,观察miR-758是否影响肝癌细胞EMT.用miR-758瞬时转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察miR-758对管腔形成的影响.软件预测显示miR-758的靶基因为AEG-1.将含miR-758结合位点的AEG-1 3'UTR构建到荧光素酶表达载体中,用miR-758和AEG-1基因3'UTR载体共同转染HepG2细胞,验证miR-758的靶基因是否为AEG-1.用miR-758瞬时转染HepG2细胞,检测AEG-1蛋白的表达量变化.结果 miR-758过表达可抑制HepG2细胞的迁移、侵袭,抑制细胞增殖和周期,抑制HepG2细胞EMT,抑制HUVEC细胞管腔形成.miR-758和AEG-1基因3'UTR质粒共同转染HepG2细胞后,荧光素酶的表达量降低.miR-758靶点AEG-13'UTR突变后,荧光素酶的表达量恢复.另外,细胞中miR-758含量升高时,Western Blot检测到AEG-1蛋白水平的表达量降低.结论 miR-758负调控癌症转移的多个步骤,包括细胞迁移、侵袭、增殖、EMT以及血管新生等.miR-758下游靶基因为AEG-1.