H9N2亚型禽流感病毒M2e蛋白在原核系统中的表达

• 作者: 刘加波 张民秀 罗思思 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: H9N2亚型禽流感病毒 M2蛋白胞外区(M2e)蛋白 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5|Q789
• 字数: 4619字
• 语种: 中文

摘要

以含有全长H9N2亚型AIV M2基因的质粒为模板,经PCR扩增得到M2e基因;利用BglⅡ和BamHⅠ之间互为同尾酶关系,构建顺次连接的多拷贝体M2e,并连接入原核表达载体pGEX-6p-1,构成2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组质粒,并转化至表达宿主菌中;将测序正确的菌液经不同浓度IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白大小,对蛋白进行可溶性分析;利用Western blot分析5种重组蛋白的反应原性.结果显示,在37℃下,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0.25、0.25、0.5、0.25、0.75 mmol/L的IPTG诱导4 h时,表达量最高;2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白大小分别为31.7、37.2、42.7、48.2、53.9 ku;对重组蛋白进行可溶性分析显示,5种重组蛋白均以包涵体形式存在;Western blot分析显示,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重组蛋白与鼠抗GST标签的单克隆抗体具有良好的特异性反应,为后期进一步获得高免疫原性蛋白和筛选具有通用免疫原性的重组蛋白奠定基础.