猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达及反应原性分析

• 作者: 丁耀忠 张杰 张永光 欧云文 王俊 马小元
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 ORF2基因 原核表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 4614字
• 语种: 中文

摘要

研究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的抗原性,为开发PCV2的检测方法奠定基础.以PCV2 CAU0673毒株的DNA为模板,扩增获得702 bp的目的片段,扩增产物克隆入pET30a(+)原核表达载体,构建pET30a-PCV2-ORF2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21(DE3);在37 ℃以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性.SDS-PAGE分析表明,该ORF2编码基因在大肠埃希菌中得到表达,蛋白大小约为34 ku;Western blot检测结果表明,该重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PPV1血清不发生交叉反应.成功构建了PCV2-ORF2原核表达载体,实现了在大肠埃希菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性,为猪圆环病毒2型检测方法建立或试剂盒的开发奠定了基础.