水牛bFGF基因的克隆、逆转录病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 农恬颖 崔佳瑜 朱鹏 杨小玲 杨素芳 石德顺 邓彦飞
• 来源期刊: 中国科技论文
• 学科: 生物学
• 关键词: 生物化学及分子生物学 水牛 碱性成纤维细胞生长因子 克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2017,（18）
• 页码范围: 2086-2091
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5428字
• 语种: 中文

摘要

对水牛碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因进行克隆、序列分析,构建bFGF表达载体,为其在水牛干细胞中的功能研究奠定基础.以水牛胎儿组织为材料提取总RNA,利用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)克隆得到的bFGF基因编码区序列,进行生物信息学分析,构建表达bFGF的逆转录病毒载体(pMXs-bFGF-IRES-GFP),并在293T细胞和水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibroblast,BFF)上进行重组载体表达鉴定.结果表明,水牛bFGF基因编码区全长468 bp,编码155个氨基酸,含有纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)家族特有的蛋白结构;逆转录病毒载体介导的bFGF基因能在293T细胞和BFF中表达.本研究克隆出水牛bFGF编码序列,构建的逆转录病毒载体能在不同真核细胞中表达bFGF.