慢病毒介导siRNA抑制1型鸭肝炎病毒复制

• 作者: 吴双 左伟勇 朱善元 洪伟鸣 王安平 王永娟 董亚青
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭病毒性肝炎 GDD模体 RdRp RNA干扰 siRNA
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 522-529
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.03.016

摘要

为筛选能抑制DHAV-1复制的siRNA,探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防治中的应用,采用PCR法扩增DHAV-1 RdRp基因,并构建pEGFP-RdRp融合表达EGFP-RdRp蛋白;根据RdRp的序列测定结果,设计3条RdRp特异siRNA,并合成相应shRNA分别插入pmiRZip△中构建pRdRp-shRNA;共转染pRdRp-shRNA和pEGFP-RdRp于HEK-293T细胞,通过荧光显微镜法、流式细胞术、相对荧光定量PCR法筛选抑制效率较高的siRNA;将高效siRNA用于病毒载体pmiRZip介导的慢病毒制备;通过计算重组慢病毒转导、DHAV-1感染的鸭胚胎成纤维细胞中病毒TCID50和RdRp基因表达量确定siRNA对病毒及病毒基因的抑制作用.结果显示,3个siRNA均能抑制RdRp基因的表达,包含GDD模体的shRNA2的抑制率最高,对应重组病毒能使DHAV-1的TCID50下降6.2 lg,RdRp基因转录量下降89.6％,抑制时间至少达120 h,为鸭病毒性肝炎临床防治提供了新思路.