深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆和表达

• 作者: 季秀玲 张琦 杨晓霞 林连兵 王俊 魏云林
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 苹果酸脱氢酶 深黄被孢霉 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 993-997,1004
• 页数: 6页
• 分类号: Q933
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201709001

摘要

目的 通过对深黄被孢霉(Mortierella isabellina)M6-22中MDH基因的分离鉴定,为深入了解苹果酸脱氢酶(MDH)的生理特性、结构和功能奠定基础,并进一步探讨生物体中MDH的代谢作用.方法 通过基因克隆的方法以深黄被孢霉的cDNA为模板,PCR扩增获得苹果酸脱氢酶基因MIMDH1.结果 测序结果显示该序列长990 bp,分别编码329个氨基酸.序列分析表明该序列与瓜笄霉菌(Choanephora cucurbitarum)MDH的相同性高达77％.将MIMDH1片段连接到表达载体pET32a(+)中构建重组表达质粒pET32aMIMDH1并转化至大肠埃希菌BL21中诱导表达,SDS-PAGE电泳检测在50 kD左右有一条蛋白表达条带,经镍柱亲和层析纯化和酶活分析结果显示所纯化的重组蛋白酶活高达379.28 U/mg.结论 克隆的cDNA序列MIMDH1是一个新的苹果酸脱氢酶基因,所编码的蛋白具有MDH的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林连兵	昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程研究中心	123	446	10.0	15.0
2	王俊	昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程研究中心	25	97	5.0	9.0
3	季秀玲	昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程研究中心	122	436	11.0	15.0
4	魏云林	昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程研究中心	148	616	13.0	18.0
5	杨晓霞	昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程研究中心	13	54	4.0	7.0
6	张琦	昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程研究中心	62	122	6.0	8.0