NFAT5基因报告载体的构建及其与miR-155关系的实验研究

• 作者: 刘真 尹斌 张亚洁 张同威 李文婷 舒彬 贾赤宇 赵盼
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: T淋巴细胞核因子5 miR-155 荧光素酶基因报告载体
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1009-1011,1014
• 页数: 4页
• 分类号: R604
• 字数: 3902字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2017.08.001

摘要

目的 通过生物信息软件预测出miR-155的靶基因,构建miR-155靶基因荧光素酶基因报告载体,验证其与miR-155的对应关系.方法 以数据库miR Base为依据,对miR-155进行生物信息学分析,通过Target Scan、Mir Base、Pic Tar三大软件预测miR-155的靶基因;将设计合成的T淋巴细胞核因子5(NFAT5)及其突变序列NFAT5-mu序列分别克隆至荧光素酶报告质粒pMIR-REPORTTM Luciferace;将第4代人胚胎肾293AD(HEK-293AD)细胞按随机数字表法分为4组:miR-155 mimics+pMIR-NFAT5组、miR-155 mimics+pMIR-NFAT5-mu组、miR-155 inhibitor+pMIR-NFAT5组、miR155 Negative control+pMIR-NFAT5组与对照质粒(pRL-TK)共转染24 h后用双荧光素酶检测试剂盒测定相对荧光素酶活性.结果 Mirbase、TargetScan、PicTar预测交叉结果显示,NFAT5基因3'UTR与miR-155存在结合互补位点;构建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu重组质粒经酶切及测序鉴定正确;双荧光素酶报告基因检测系统显示:pMIR-NFAT5+ miR155 mimics组较pMIR-NFAT5+miR-control组荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(P＜0.01);而其他组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu荧光素醇报告基因重组质粒;证实miR-155对NFAT5基因mRNA 3'-UTR具有靶向调控作用,为下一步研究miR-155在吸入性肺损伤机制中的作用提供前期实验室数据和方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	舒彬	河北北方学院研究生部	2	9	1.0	2.0
2	赵盼	河北北方学院研究生部	2	0	0.0	0.0