Nfic基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-20a靶向关系的验证

• 作者: 周杰 李晓霞 王宝利 王珊
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 微RNAs 3′非翻译区 miR-20a Nfic 骨髓基质细胞系 荧光素酶报告基因
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 1065-1068
• 页数: 4页
• 分类号: R349.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20160318

摘要

目的：构建核因子C（nuclear factor I-C，Nfic）基因3′非编码区（3′UTR）荧光素酶报告质粒，利用双荧光素酶报告基因验证microRNA-20a（miR-20a）与其潜在靶基因Nfic的靶向关系。方法通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-20a与Nfic基因3′UTR潜在的互补结合位点；PCR扩增出Nfic基因3′UTR序列，将此序列克隆至荧光素酶报告载体pMIR-Report Luciferase；将重组荧光素酶报告质粒与miR-20a mimics（实验组）或NC mimics（对照组）共同转染293-AD细胞，收集细胞后通过双荧光素酶报告系统检测2组细胞的荧光素酶活性，从而对Nfic与miR-20a的靶向调节关系进行鉴定。将miR-20a mimics和NC mimics分别转染骨髓基质细胞系ST2，裂解细胞提取蛋白后采用Western blotting检测NFIC蛋白的表达水平。结果构建的重组荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确。双荧光素酶报告基因检测显示，与对照组相比，miR-20a可以抑制Nfic 3′UTR报告基因载体的荧光素酶活性（P<0.05）；Western blotting结果显示，与对照组相比，ST2细胞转染miR-20a mimics后NFIC蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了Nfic基因3′UTR荧光素酶报告质粒,而miR-20a可以直接作用于Nfic基因3′UTR，抑制其荧光素酶活性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晓霞	天津医科大学基础医学院	63	347	8.0	16.0