Bcl-6基因3'UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-346靶向关系的验证

• 作者: 刘海冰 吴晶晶 张悦 汤新逸 田新宇 田洁 芮棵 袁靖 陈娟
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Bcl-6基因 微小RNA 3'非编码区 荧光素酶报告质粒
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 122-125
• 页数: 4页
• 分类号: R561.4
• 字数: 2701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y130121

摘要

目的:构建Bcl-6基因3'非编码区(3'untranslated region,3'UTR)荧光素酶报告质粒,分析miR-346对Bcl-6的调控作用.方法:通过PicTar数据库和miRanda数据库预测可能与Bcl-6基因3'UTR作用的miRNA;将人工合成的Bcl-6基因3'UTR区序列克隆至荧光素酶报告质粒psiCHECK-2;将重组荧光素酶报告质粒和miRNA mimics共转染293T细胞,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.结果:PicTar数据库和miRanda数据库预测交叉结果显示,miR-346与Bcl-6基因3'UTR存在互补结合位点;构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确;重组质粒和miR-346 mimics共转染293T细胞后,荧光素酶报告质粒表达的荧光素酶活性降低66％左右.结论:成功构建了Bcl-6基因3'UTR荧光素酶报告质粒,筛选出和Bcl-6表达相关的miRNA即miR-346.