靶向猪CLTC基因miRNA的预测与验证

• 作者: 于静 何珂 杨松柏 王亚莉 赵阿勇
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 猪 CLTC miRNA 胞吞 双荧光素酶报告基因载体
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 389-394
• 页数: 6页
• 分类号: S852
• 语种: 中文
• DOI: 10.11833/j.issn.2095-0756.2017.03.002

摘要

网格蛋白介导的胞吞是病毒侵入细胞的重要途径,网格蛋白重链(clathrin heavy chain,CLTC)是形成网格蛋白小窝结构的重要组成部分.针对CLTC基因的转录后调控特别是调控猪Sus scrofa CLTC的miRNA目前还不太清楚.本研究旨在筛选出调控猪CLTC基因的miRNA.利用生物信息学方法预测出6个靶向猪CLTC基因的miRNA,将猪CLTC基因3′UTR克隆至双荧光素酶报告基因载体psiCHECK2中获得双荧光素酶报告基因重组载体psiCHECK2-CLTC-3′UTR.将预测得到的miRNA分别和重组载体psiCHECK2-CLTC-3′UTR共转染到细胞中,以乱序序列作为阴性对照(NC),检测miRNA对重组质粒荧光素酶活性的影响.结果发现miR-205,miR-1,miR-129-5p和miR-206均能够显著抑制荧光素酶活性(P<0.05).在猪肾上皮细胞系PK15细胞中超表达miR-1和miR-129-5p后,定量PCR(q-PCR)结果显示:猪CLTC基因的表达量显著下调.突变了psiCHECK2-CLTC-3′UTR载体中这4个miRNA的种子序列的结合位点发现:miR-1对突变质粒中的荧光素酶无显著抑制作用.表明miR-1与猪CLTC基因有直接的靶向关系,并通过其种子序列抑制CLTC基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵阿勇	浙江农林大学动物科技学院	20	44	4.0	6.0
2	何珂	浙江农林大学动物科技学院	9	28	2.0	5.0
3	杨松柏	浙江农林大学动物科技学院	6	4	1.0	2.0
4	王亚莉	浙江农林大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0
5	于静	浙江农林大学动物科技学院	3	13	2.0	3.0