牦牛Smad 4基因3'UTR区双荧光素酶载体构建及与bta-miR-146a的靶向验证

• 作者: 强巴央宗 徐业芬 杨士承 牛家强 王玉恒 程玲华 索朗斯珠 郭敏
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牦牛 bta-miR-146a Smad 4 荧光素酶活性
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 1366-1376
• 页数: 11页
• 分类号: S823.85
• 字数: 6348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.07.005

摘要

旨在鉴定牦牛Smad 4基因与bta-miR-146a的靶向关系,为探究它们在牦牛卵巢卵泡发育过程中的可能分子调控机制提供理论基础.利用miRBase数据库和MEGA 6.0软件分析miR-146a在不同物种中的保守性,同时利用TargetScan软件预测其潜在靶基因,通过构建psiCHECK2双荧光素酶报告基因载体进行靶向验证.生物信息学分析结果显示,miR-146a成熟序列在脊椎动物中具有高度的保守性,并预测到178个与卵巢卵泡发育相关的潜在靶基因,从中选取Smad 4基因分析发现其3’非编码区域(3'UTR)与bta-miR-146a存在结合位点;进一步成功构建牦牛Smad 4基因3'UTR野生型及突变型psiCHECK2双荧光素酶报告质粒,荧光素酶活性检测结果显示,bta-miR-146a mimic对牦牛Smad 4基因3'UTR野生型报告质粒荧光活性有明显的下调作用,分别与突变型及NC对照组差异显著(P＜0.05).本研究初步证实,牦牛Smad 4基因是bta-miR-146a的靶基因,从而提示bta-miR-146a可能通过调控Smad 4基因在牦牛卵巢卵泡发育过程中的表达发挥作用.