FOXP3基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定

• 作者: 刘竞丽 李劲频 杜伟伟 莫雪安 陈泽志
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 双荧光素酶基因报告 转录因子叉头样p3 微小RNA-608 3'-非编码区
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 170-173
• 页数: 4页
• 分类号: R-33
• 字数: 3129字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建FOXP3基因3'-UTR双荧光素酶基因报告载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs.方法:利用PCR方法,根据FOXP3基因3'-UTR序列信息设计其扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’-UTR序列,将其克隆到pmiRB-REPORT双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与FOXP3基因3’-UTR相互作用的miRNAs;利用LipofectaminTM 2000试剂将miRNAs mimics与构建好的FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体共转染于常规培养的293T细胞中,然后使用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,并与空白对照相比较.结果:经酶切及基因测序验证,成功构建含有FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体;Targetscan软件预测显示,FOXP3基因3’-UTR可能是miR 608的作用靶位点;双荧光报告显示,miR 608 mimics组比空白对照组[(0.700 0±0.016 41)比(1.000±0.055 75) (P＜0.001)] FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降30％.结论:FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功,初步证实miR 608对FOXP3有调控作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李劲频	广西医科大学第一附属医院神经内科	33	169	6.0	10.0
2	刘竞丽	广西医科大学第一附属医院神经内科	49	147	6.0	8.0
3	莫雪安	广西医科大学第一附属医院神经内科	104	497	12.0	16.0
4	陈泽志		4	11	3.0	3.0
5	杜伟伟	广西医科大学第一附属医院神经内科	4	11	3.0	3.0