SOCS3基因3′端非翻译区荧光素酶报告载体的构建及活性鉴定

• 作者: 刘晓梅 单锴 庞蓉蓉 李妍 王迎伟 赵聃
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞因子信号抑制蛋白-3基因 3′端非翻译区 微小RNA 荧光素酶报告载体
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 307-311
• 分类号: R34
• 字数: 3534字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2012.04.008

摘要

目的:研究细胞因子信号抑制蛋白-3(suppressors of cytokine signaling-3,SOCS3)基因3′端非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)微小RNA(microRNA,miRNA)的调控作用,构建重组SOCS3基因3′-UTR荧光素酶报告载体,并通过荧光素酶活性测定,初步分析可能调控SOCS3基因表达的miRNAs.方法:采用PCR方法从原代培养的小鼠星形胶质细胞基因组DNA中扩增SOCS3基因3′-UTR序列,插入荧光素酶报告载体pGL3-Promoter,获得重组载体pGL3-Promoter/SOCS3;通过Target Scan5.2、RNAhybrid 和FINDTAR3软件预测可能与SOCS3基因3′-UTR结合的miRNAs;将pGL3-Promoter/SOCS3重组质粒和miRNAs共转染HEK 293T细胞,测定SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性.结果:酶切及核酸测序证实,成功构建了SOCS3基因3′-UTR序列的荧光素酶报告重组子;miRNA靶位点预测显示,SOCS3基因可能是miR-203、miR-291a-5p、miR-9、miR-140和miR-130b的作用靶标;与对照组相比,miR-203、miR-291a-5p、miR-140能使SOCS3 3′-UTR荧光素酶的活性显著降低.结论:成功构建了SOCS3 基因3′-UTR荧光素酶报告载体,且miR-203、miR-291a-5p、miR-140可显著降低其荧光素酶的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晓梅	徐州医学院微生物与免疫学教研室	25	62	5.0	6.0
2	李妍	南京医科大学微生物与免疫学系	27	79	4.0	8.0
3	王迎伟	南京医科大学微生物与免疫学系	49	239	9.0	14.0
4	赵聃	南京医科大学微生物与免疫学系	21	11	2.0	3.0
5	庞蓉蓉	南京医科大学微生物与免疫学系	5	1	1.0	1.0
6	单锴	南京医科大学微生物与免疫学系	6	1	1.0	1.0