DNMT3B mRNA 3′非编码区报告基因载体的构建与功能验证

• 作者: 姜怡邓 徐华 曹成建 杨晓玲 杨程 王洁 王磊 蔡欣
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: DNA甲基转移酶3B 微 RNAs 动脉粥样硬化 表遗传学 双荧光素酶报告基因系统
• 年，卷（期）: 2014,（13）
• 所属期刊栏目: 论著?基础研究
• 页码范围: 1587-1590
• 页数: 4页
• 字数: 3172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2014.13.020

摘要

目的：构建用于鉴定microRNA（miRNA）靶基因的报告基因系统并进行功能验证，为研究动脉粥样硬化的发生发展机制奠定良好基础。方法在pGL3-control载体的荧光素酶基因下游克隆位点插入DNA甲基转移酶3B（DNMT3B）3′非编码区序列，经酶切、测序验证是否插入及正确性。生物信息学分析 DNMT3B与 miRNA-125b的靶向关系，并用 miRNA-125b过表达载体与所构建载体共转染人血管平滑肌细胞，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了DNMT3 B 3′非编码区报告基因载体，经酶切和测序鉴定正确；共转染细胞24 h后，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性，结果显示与空载体对照组相比，构建载体组荧光素酶活性下降了54．8％（P＜0．01）。结论成功构建了DNMT3B mRNA 3′非编码区报告基因载体，且提示miRNA-125b靶向调控了DNMT3B。