NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定

• 作者: 于游 张才全 邵新宏 韩渊
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NOTCH1 微小RNA 3'非编码区 双荧光素酶报告载体 基因调控 基因转染
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 312-316
• 页数: 5页
• 分类号: R392.4
• 字数: 4458字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2013.03.020

摘要

目的:构建含NOTCH1基因3'-UTR段双荧光素酶报告载体,并验证其活性.方法:使用PCR方法扩增含NOTCH1基因3'-UTR区序列,插入到双酶切的双荧光素酶报告载体中；使用生物信息学方法预测可能与NOTCH1基因3'-UTR相互作用的miRNA；使用lipofectamine 2000转染试剂将重组质粒或空质粒和miR-34a inhibitor或control真核表达载体共转染HEK293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.结果:得到含NOTCH1基因3'-UTR(1 648 bp)序列的双荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证.NOTCH1基因3'-UTR上可能有miR-34a的调控作用靶点；用重组质粒和miR-34a inhibitor共转染的HEK293T组的荧光素酶活性比空质粒组高45％.结论:含NOTCH1基因3'-UTR双荧光素酶报告载体构建成功,miR-34a对NOTCH1基因有调控作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张才全	重庆医科大学附属第一医院胃肠外科	161	742	13.0	18.0
2	于游	重庆医科大学附属第一医院胃肠外科	7	60	4.0	7.0
3	韩渊	新疆医科大学第二附属医院肿瘤外科	15	88	5.0	9.0
4	邵新宏	新疆医科大学第五附属医院普外科	5	19	3.0	4.0