miR-155-5p慢病毒载体的构建及其对正常胃上皮增殖的影响

• 作者: 任海风 刘亚坤 姜玉 宋乐 汪思应 赵荣荣 魏道严
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 聚合酶链式反应技术 微小RNA 胃癌细胞
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 520-525
• 页数: 6页
• 分类号: R363.2+1
• 字数: 4819字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2018.04.006

摘要

目的 构建过表达miR-155-5p慢病毒表达载体,建立稳定过表达miR-155-5p的GES-1胃上皮细胞株.在细胞水平上观察细胞增殖能力的变化.方法 第一部分:PCR扩增获得miR-155-5p基因片段;将该基因片段与已线性化的病毒载体连接;将重组质粒转化到DH5α细胞,进行克隆分离、质粒DNA提取和DNA测序.第二部分:序列证实了的GV-369-has-miR-155-5p载体和pHelper 1.0以及pHelper2.0载体共同转染到293-T细胞,用于慢病毒的包装,然后进行慢病毒收获、浓缩与纯化.将纯化的miR-155-5p慢病毒用来感染细胞,经过嘌呤霉素筛选后建立稳定过表达miR-155-5p的GES-1细胞株.qRT-PCR检测细胞株中miR-155表达;Western blot检测KLF4蛋白表达及MTIT法检测稳定表达miR-155-5p细胞的增殖.结果 过表达miR-155-5p的重组慢病毒构建成功;miR-155在恶性程度较高的SGC-7901胃癌细胞株中高表达(P＜0.05);建立了miR-1556p稳定过表达的GES-1细胞株;过表达miR-155-5p抑制GES-1细胞中KLF4蛋白表达(P＜0.05),且促进细胞增殖.结论 miR-155可能通过负向调控KLF4表达,参与调控胃癌发生发展.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘亚坤	安徽医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室	9	11	2.0	3.0
2	宋乐	安徽医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室	1	0	0.0	0.0
3	任海风	安徽医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室	4	2	1.0	1.0
4	姜玉	安徽医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室	6	11	2.0	3.0
5	赵荣荣	安徽医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室	3	1	1.0	1.0
6	魏道严	安徽医科大学基础医学院病理学与病理生理学教研室	4	12	2.0	3.0