以PPARγ2为靶点的传统中药细胞学筛选方法的建立和应用

• 作者: 徐剑 朱惠娟 李乃适 潘慧 王林杰 王欣 阳洪波 龚凤英
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 过氧化物酶体增生物激活受体γ2 中药水溶性提取物 质粒构建 稳定转染 3T3-L1前脂肪细胞
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 619-624
• 页数: 6页
• 分类号: R58
• 字数: 4096字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含人PPARγ2基因启动子的荧光素酶表达质粒,通过建立稳定转染该质粒的细胞系,建立传统中药细胞学筛选方法.方法 首先以pGL3-Basic-Luc和pGL3-Enhancer-Luc为载体构建含不同长度人PPARγ2基因启动子序列的荧光素酶表达质粒.脂质体转染,建立稳定转染上述质粒的3T3-L1细胞系.选取红花和茜草等28种可能具有减肥作用的中药制备成中药水溶性提取物(ECMH),观察不同浓度 ECMH对3T3-L1细胞中荧光素酶表达的影响.结果 pGL3-Enhancer-PPARγ2 625 bp-Luc质粒稳定转染的细胞荧光素酶表达最高,是本底的200倍左右.故采用此细胞系进行传统中药筛选,红花ECMH在10、100和1 000 μg/mL时均可使3T3-L1细胞中荧光素酶的表达明显增加,分别为对照组的1.63倍、1.90倍和2.30倍(P<0.05).在10~1 000 μg/mL荷叶、茜草ECMH也均能促进3T3-L1细胞中荧光素酶的表达,在浓度为1 000 μg/mL时荷叶和茜草对3T3-L1细胞中荧光素酶的表达作用最强,分别为对照组的2.03倍(P<0.01)和2.00倍(P<0.01).结论 成功构建pGL3-Enhancer-PPARγ2 625 bp-Luc质粒,并建立稳定转染的3T3-L1细胞系.红花、荷叶和茜草的ECMH能明显促进3T3-L1细胞中人PPARγ2基因启动子的活性,它们可能成为未来潜在的减肥药物.