以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用

• 作者: 张雪霞 徐岩 栗若兰 王欣荣 苟小军 褚以文 赵峰 路新华 郑智慧 郑海州
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: FK506结合蛋白52 FK506 FK520 雷帕霉素 高通量筛选 抑制剂
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 微生物药物筛选
• 页码范围: 22-27
• 页数: 6页
• 分类号: R979.5|Q819
• 语种: 中文

摘要

目的 发现新的FKBP52抑制剂类药物,建立以人FKBP52为靶点的高通量药物筛选模型.方法 通过大肠埃希菌表达系统重组表达FKBP52蛋白,并进行纯化.基于FKBP52的肽基-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)的活性特性,建立FKBP52高通量药物筛选体系.对本公司化合物库中的31558个放线菌及真菌次级代谢产物粗提物进行筛选.结果 成功构建重组表达菌株BL21 (rosetta)/pET-30a/FKBP52.纯化后的重组表达人FKBP52蛋白纯度大于90％,并具有很好的PPIase活性.阳性药FK506能剂量依赖地抑制FKBP52活性,IC5o为12.035ng/mL.筛选得到121个抑制率大于80％的样品,其中11株放线菌的次级代谢产物中含FK506,6株放线菌的次级代谢产物中含FK520,7株放线菌的次级代谢产物中含雷帕霉素.对随机抽取的100块96孔板筛选数据进行统计,模型的信号/本底比平均值为2.35±0.26,Z'因子平均值为0.78±0.1.结论 本研究成功建立了人FKBP52抑制剂高通量药物筛选模型,该方法具有快捷、灵敏度高、稳定性好的特点,不仅可以快速进行新FKBP52抑制剂的筛选,还可以实现对FKBP52已知抑制剂如FK506、FK520和雷帕霉素等产生菌的定向筛选.