CCR7重组慢病毒的构建及其表达对结肠癌细胞侵袭的影响

• 作者: 曾浩涛 林汉利 王晓玲 陈小欢
• 来源期刊: 国际医药卫生导报
• 关键词: CCR7基因 慢病毒 结肠癌 细胞迁移 细胞侵袭
• 年，卷（期）: 2017,（23）
• 所属期刊栏目: 科研课题
• 页码范围: 3664-3669
• 页数: 6页
• 字数: 4270字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2017.23.005

摘要

目的 构建含有CCR7的重组基因工程慢病毒,并转导结肠癌HT29细胞,高效表达CCR7蛋白,并研究趋化因子受体CCR7的表达在人结肠癌HT29细胞体外转移中的作用.方法 提取HT29细胞的RNA,RT-PCR扩增CCR7基因,克隆至慢病毒载体pLVX-acGFP-N1,形成重组慢病毒载体pLVX-acGFP-CCR7,转染293T细胞,得到慢病毒LV-CCR7,转导慢病毒LV-CCR7至HT29细胞,经puromycin筛选10 d.提取细胞的RNA,QPCR检测CCR7基因相对表达量的变化.划痕和Transwell小室实验分别检测HT29细胞和CCR7过表达细胞迁移和侵袭能力的差异.Western blotting检测CCR7蛋白和MMP-9蛋白相对表达量.结果 酶切和测序都表明CCR7克隆至慢病毒载体,慢病毒成功转导至HT29细胞,QPCR检测HT29细胞中CCR7表达升高了15.4倍,Western blotting检测CCR7蛋白表达上升了4.7倍.CCR7过表达的HT29细胞向划痕处爬行的速度明显快于HT29细胞对照组;过表达CCR7的HT29细胞透过膜的数量高于普通HT29细胞.过表达CCR7的HT29细胞与细胞侵袭转移相关的基质金属蛋白酶表达量显著高于普通HT29细胞.结论 利用含有CCR7的重组基因工程慢病毒成功构建了高效表达CCR7蛋白的结肠癌HT29细胞.研究发现高效表达的CCR7能促进结肠癌HT29细胞的体外迁移侵袭能力,增强了基质金属蛋白酶的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晓玲	中山大学附属第八医院消化内科	9	127	4.0	9.0
2	林汉利	中山大学附属第八医院消化内科	3	47	2.0	3.0
3	陈小欢	中山大学附属第八医院消化内科	4	6	2.0	2.0