敲除Dock180抑制大鼠H9C2心肌细胞系增殖和促凋亡

• 作者: 刘成 扶艳波 李刚 胡苏蕾 邓琴
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: Dock180 心肌细胞 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 493-499
• 页数: 7页
• 分类号: R541.4
• 字数: 3561字
• 语种: 中文

摘要

目的探讨敲除细胞质移动蛋白1(Dock180)对大鼠H9C2心肌细胞系增殖和凋亡的影响及其机制.方法用CRISPR/Cas9系统构建single guide RNA (sgRNA) Dock180质粒,并将其包装成敲除Dock180重组慢病毒再进行筛选,建立敲除Dock180的H9C2心肌细胞稳定株.实验分为A:阴性慢病毒组(Cas9)、B:敲除Dock180组、C:阴性慢病毒低氧组、D:敲除Dock180低氧组.RT-PCR检测各组细胞Dock180 mRNA表达水平,Western blot检测相关蛋白的表达水平,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果B组和D组Dock180 mRNA和蛋白无表达;分别较A组和C组, B组和D组p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低(P <0.01),Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P<0.05,P<0.01);较A组,C组Dock180 mRNA和蛋白表达降低,p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低,Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P<0.05,P<0.01);较B组、D组p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低,Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P<0.05,P<0.01).结论敲除Dock180可抑制H9C2心肌细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用可能通过p-ERK1/2、Bax和Bcl-2分子介导.