人髓核细胞分离、传代培养方法的建立及意义

• 作者: 吴燕 孙继芾 岳佳伟 李大鹏 蒋璐 黄永辉
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 髓核细胞 Ⅱ型胶原酶消化法 单层贴壁法 细胞培养 椎间盘退变
• 年，卷（期）: 2017,（32）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4,前插1
• 页数: 5页
• 分类号: R681.5
• 字数: 2948字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2017.32.001

摘要

目的 建立一种体外分离、培养人髓核细胞(NPCs)的新方法,并探讨其意义.方法 采用0.2% Ⅱ型胶原酶消化法分离人正常NPCs,单层贴壁法进行传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态.取第1、2、3代NPCs,采用CCK-8法检测细胞增殖能力(以吸光度值表示),连续检测12天.取第2代NPCs,采用免疫组化法检测Ⅱ型胶原(Col-2)、细胞角蛋白18(KRT-18)、KRT-19、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖转运子1(GLUT-1)、Sox-9、聚集蛋白聚糖(ACAN)、CD24阳性表达率.结果 分离的NPCs呈多角形或短梭形,类似于软骨细胞;第4代以后,NPCs细胞突起延长,呈长梭形,生长缓慢,出现老化现象.NPCs生长曲线呈S形:1~2天细胞生长缓慢;3~7天细胞生长迅速,进入对数生长期;8天后进入平台期,细胞增殖缓慢.连续培养12天,第1、2、3代NPCs相同时间点吸光度值比较差异均无统计学意义(P均>0.05).第2代NPCs中Col-2、KRT-18、KRT-19、HIF-1α、GLUT-1、Sox-9、ACAN、CD24阳性表达率均≥85.6%(85.6%~91.2%).结论 单纯0.2% Ⅱ型胶原酶消化法及单层贴壁法可分离、培养人NPCs,并经免疫组化染色鉴定证实;传代3代以内的NPCs细胞形态及增殖能力均无明显改变,可作为椎间盘退变相关研究的种子细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李大鹏		43	224	8.0	13.0
2	黄永辉		91	576	13.0	20.0
3	吴燕		38	111	5.0	8.0
4	岳佳伟		6	19	3.0	4.0
5	孙继芾		24	126	6.0	10.0
6	蒋璐		11	44	3.0	6.0