胶原酶消化法、组织块贴壁法培养的大鼠RASMCs生长、增殖及分化对比观察

• 作者: 徐志云 杨帆 王国坤 王杨 赵志敏 龚德军
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 血管平滑肌细胞 胸主动脉 胶原酶消化法 组织块贴壁法 细胞生长 细胞增殖 细胞分化 大鼠
• 年，卷（期）: 2017,（28）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 33-36
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2017.28.009

摘要

目的 比较胶原酶消化法、组织块贴壁法培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(RASMCs)生长、增殖及分化的影响.方法 选择6~8周龄雄性SD大鼠6只,取胸主动脉及主动脉弓部,保留中膜备用.分别采用胶原酶消化法、组织块贴壁法培养RASMCs.采用α-肌动蛋白免疫荧光染色法鉴定RASMCs,并比较两种方法培养第0、24、36、48、60、72、84、96 h RASMCs生长情况.采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期.采用实时定量PCR法检测细胞表型标志基因表达,包括收缩型标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转胶蛋白(TAGLN)、肌球蛋白重链11(MYH-11)、转录因子1(SP-1)及合成型标志基因骨桥蛋白(OPN).结果 胶原酶消化法、组织块贴壁法均成功分离出RASMCs,细胞纯度均在95%以上.培养36、48、60、72 h时,组织块贴壁法分离、培养的RASMCs计数多于胶原酶消化法(P均<0.05).培养36、48、60、72 h时,胶原酶消化法分离、培养的RASMCs活力优于组织块贴壁法(P均<0.05).两种方法分离、培养的RASMCs G1、G2、S期细胞所占比例比较差异均无统计学意义(P均>0.05).胶原酶消化法分离、培养的RASMCs中α-SMA、TAGLN、MYH-11 mRNA相对表达量均高于组织块贴壁法,OPN mRNA相对表达量低于组织块贴壁法(P均<0.05).结论 胶原酶消化法、组织块贴壁法均成功分离、培养出RASMCs.胶原酶消化法分离、培养的RASMCs生长、增殖较慢,但保持收缩表型;组织块贴壁法分离、培养的RASMCs生长、增殖较快,但有向合成表型转化的趋势.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐志云		360	1416	15.0	20.0
2	龚德军		48	127	6.0	7.0
3	王杨		6	18	3.0	4.0
4	杨帆		32	151	8.0	11.0
5	王国坤		18	32	4.0	5.0
6	赵志敏		2	5	1.0	2.0