粉尘螨变应原第5组分单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 俞黎黎 孙金霞 崔玉宝 张承伯 李启松 杨李 马桂芳
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: Der f 5 粉尘螨 单克隆抗体 特性鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-12
• 页数: 5页
• 分类号: R184.39
• 语种: 中文

摘要

本研究制备并鉴定了鼠抗粉尘螨变应原Der f 5的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb).将质粒pET28a(+)Der f 5转化ArcticExpress (DE3)感受态细胞,取单个菌落接种培养,加入IPTG诱导表达,经纯化获得Der f 5重组蛋白.利用Der f 5重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏细胞与其骨髓瘤细胞融合.通过间接ELISA法筛选特异性分泌抗体的杂交瘤细胞.用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化.通过间接ELISA、Western blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性.最终获得3株稳定分泌鼠抗粉尘螨变应原Der f 5的高效价单克隆抗体.研究分析表明该3株单抗均能识别重组Der f 5蛋白和天然的粉尘螨提取物.本实验成功制备了3株鼠抗粉尘螨变应原Der f 5的单克隆抗体,为建立粉尘螨主要变应原Der f 5检测及纯化方法奠定了基础.