猪源铁蛋白重链亚基纳米粒的制备

• 作者: 吴秋玲 和春昊 张留君 李滨洲 杨国宇 王亚宾 郭珍珍 陈丽颖
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 铁蛋白 纳米粒 免疫佐剂
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧与兽医科学
• 页码范围: 361-365
• 页数: 5页
• 分类号: S852.2
• 字数: 4299字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank公布的铁蛋白重链基因序列,设计出1对特异性引物;提取猪心脏总RNA,采用RT-PCR 方法扩增出铁蛋白重链亚基基因片段,经测序正确后,再将双酶切的纯化产物与PET32a原核表达载体相连接,构建重组质粒、把测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.将表达的重组蛋白用 Ni+离子亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物.将鉴定正确的铁蛋白产物置于透射电镜下观察其表征,以进一步鉴定铁蛋白纳米颗粒是否自组装成功.结果表明,本研究成功表达并纯化出了猪源铁蛋白重链亚基,而透射电镜下观察到了大量直径为10～13 nm的颗粒,说明重组猪源铁蛋白重链纳米粒自组装成功.