大肠杆菌肠毒素基因突变体在乳酸菌中的表达与免疫学鉴定

• 作者: 余飞燕 尹光辉 张荣光 李健 段广才 王琛
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乳酸乳球菌 大肠杆菌 肠毒素 基因重组 免疫佐剂
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 513-515,519
• 页数: 4页
• 分类号: R446.6
• 语种: 中文

摘要

目的 构建表达大肠杆菌肠毒素基因突变体mlt63的乳酸菌工程菌株,为黏膜免疫佐剂研究建立重要基础.方法 从前期构建的质粒pBV-mlt63中经PCR扩增mlt63基因,经双酶切将mlt63与质粒载体pNZ8110连接.用连接产物转化大肠杆菌MC1061菌株,从重组菌株中提取pNZ8110-mlt63,用于电转化Lactococcus lactis NZ3900菌株;经质粒双酶切和测序,鉴定重组菌株L.lactis NZ3900/pNZ8110-mlt63.采用nisin诱导重组乳酸菌表达mLT63,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 mlt63 PCR扩增产物长度与预期相符;重组菌株鉴定结果显示L.lactisNZ3900/pNZ8110-mlt63构建正确;Western blot分析在重组菌株中检出2条mlt63表达的蛋白带,分子量分别为10 kD和40 kD.结论 本研究首次将mlt63基因克隆至乳酸乳球菌中,并表达出具有抗原活性的蛋白,鉴于目前亟需安全有效的黏膜免疫佐剂,本研究发现将对该领域研究产生重要影响,对胃肠感染性疾病口服疫苗研究具有促进作用.