病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备

• 作者: 刘志玲 吴晓薇 朱道中 林志雄 段燕喻 田纯见 陈茹
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 病毒性神经坏死病 实时定量RT-PCR 标准物质
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 102-107
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 字数: 4438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2018.02.027

摘要

利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质.设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至pGEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA.初步定量稀释至约108 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异＜5％;稳定性检验表明,室温(20～25℃)保存7 d、冷藏(2～8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化.采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算.核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×108 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品.