独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞蛋白激酶R样内质网激酶/免疫球蛋白结合蛋白信号通路的影响

• 作者: 刘淑如 刘献祥 吴广文 戴一琛 许惠凤 邱建清 郑春松 陈俊 陈振沅
• 来源期刊: 中医正骨
• 关键词: 骨关节炎 软骨细胞 独活寄生汤 信号传导 大鼠
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-10
• 页数: 10页
• 字数: 4786字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6015.2018.08.001

摘要

目的:观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic retic-ulum kinase,PERK)/免疫球蛋白结合蛋白(immunoglobulin-binding protein,BiP)信号通路的影响.方法:将36只2月龄清洁级雄性SD大鼠随机分为含药血清组和空白血清组,每组18只.含药血清组按照9.3 g·kg-1以独活寄生汤灌胃、空白血清组按照10 mL·kg-1以生理盐水灌胃,每天1次.连续灌胃7 d后,麻醉下行腹主动脉采血,获取独活寄生汤含药血清和空白血清.取4周龄SD大鼠膝关节,分离软骨进行软骨细胞培养,传代至第3代,以白细胞介素-1β干预24 h后获得退变软骨细胞.将获得的退变软骨细胞分为2组,分别以独活寄生汤含药血清(独活寄生汤组)和空白血清(空白组)进行干预.分别在干预24 h、48 h和72 h后,测定2组退变软骨细胞凋亡率、PERK mRNA含量、Bip mRNA含量、真核细胞翻译起始因子-2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF-2α)mRNA含量、转录激活因子-4(activating transcription factor 4,ATF-4)mRNA含量、生长抑制DNA损伤基因153抗原(growth arrest and DNA damage-inducible 153,GADD153)mRNA含量、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine containing aspartate specific protease,Caspase)-9活性及Caspase-3活性.结果:①退变软骨细胞凋亡率.时间因素与分组因素存在交互效应(F=9.022,P=0.038).2组软骨细胞凋亡率总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=325.246,P=0.000);干预后不同时点之间软骨细胞凋亡率的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=389.768,P=0.000);2组软骨细胞凋亡率随时间变化均呈降低趋势;干预后各时点独活寄生汤组软骨细胞凋亡率均低于空白组(t=14.055,P=0.000;t=13.264,P=0.000;t=12.183,P=0.000).②退变软骨细胞中PERK mRNA含量.时间因素与分组因素不存在交互效应(F=3.002,P=0.157);独活寄生汤组软骨细胞中PERK mRNA含量总体低于空白组,即存在分组效应(F=17.833,P=0.013);干预后不同时点之间软骨细胞中PERK mRNA含量的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=43.060,P=0.003);2组软骨细胞中PERK mRNA含量随时间变化均呈降低趋势.③退变软骨细胞中Bip mRNA含量.时间因素与分组因素不存在交互效应(F=4.092,P=0.106);独活寄生汤组软骨细胞中Bip mRNA含量总体低于空白组,即存在分组效应(F=15.136,P=0.018);干预后不同时点之间软骨细胞中Bip mRNA含量的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=62.968,P=0.001);2组软骨细胞中Bip mRNA含量随时间变化均呈降低趋势.④退变软骨细胞中eIF-2αmRNA含量.时间因素与分组因素不存在交互效应(F=2.138,P=0.201);独活寄生汤组软骨细胞中eIF-2αmRNA含量总体低于空白组,即存在分组效应(F=155.852,P=0.000);干预后不同时点之间软骨细胞中eIF-2αmRNA含量的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=50.328,P=0.000);2组软骨细胞中eIF-2αmRNA含量随时间变化均呈降低趋势,且降低趋势基本一致.⑤退变软骨细胞中ATF-4 mRNA含量.时间因素与分组因素存在交互效应(F=14.612,P=0.017);2组软骨细胞中ATF-4 mRNA含量总体比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=33.703,P=0.004);干预后不同时点之间软骨细胞中ATF-4 mRNA含量的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=187.700,P=0.000);2组软骨细胞中ATF-4 mRNA含量随时间变化均呈降低趋势;干预后各时点独活寄生汤组软骨细胞中ATF-4 mRNA含量均低于空白组(t=4.343,P=0.012;t=3.915,P=0.017;t=10.719,P=0.000).⑥退变软骨细胞中GADD153 mRNA含量.时间因素与分组因素不存在交互效应(F=3.053,P=0.116);独活寄生汤组软骨细胞中GADD153 mRNA含量总体低于空白组,即存在分组效应(F=16.946,P=0.015);干预后不同时点之间软骨细胞中GADD153 mRNA含量的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=88.206,P=0.000);2组软骨细胞中GADD153 mRNA含量随时间变化均呈降低趋势.⑦退变软骨细胞中Caspase-9活性.时间因素与分组因素不存在交互效应(F=1.266,P=0.327);独活寄生汤组软骨细胞中Caspase-9活性总体低于空白组,即存在分组效应(F=21.164,P=0.010);干预后不同时间点之间软骨细胞中Caspase-9活性的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=263.384,P=0.000);2组软骨细胞中Caspase-9活性随时间变化均呈降低趋势,且降低趋势基本一致.⑧退变软骨细胞中Caspase-3活性.时间因素与分组因素不存在交互效应(F=1.346,P=0.314);独活寄生汤组软骨细胞中Caspase-3活性总体低于空白组,即存在分组效应(F=19.422,P=0.012);干预后不同时间点之间软骨细胞中Caspase-3活性的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=130.649,P=0.000);2组软骨细胞中Caspase-3活性随时间变化均呈降低趋势,且降低趋势基本一致.结论:独活寄生汤含药血清可通过调控大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路,抑制因内质网应激反应引起的软骨细胞凋亡.