大鲵蛙病毒编码96L蛋白(ADRV-96L)的腺苷三磷酸酶活性和促进细胞生长作用

• 作者: 张奇亚 张锐
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 大鲵蛙病毒(ADRV) 病毒基因 腺苷三磷酸酶 酶活性 细胞生长
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 微生物功能基因组研究
• 页码范围: 1090-1099
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170945

摘要

[背景]腺苷三磷酸酶(ATPase,ATP酶)是控制DNA复制起始及宿主对病原微生物的应答开关.近期关于水生动物虹彩病毒基因组学的研究表明,它们共享编码ATPase的基因.[目的]大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus,ADRV)属于虹彩病毒科,是世界现存最大两栖动物——中国大鲵的致死性病毒病原体.为了鉴定病毒基因及其表达产物对病毒复制和宿主细胞的影响,对ADRV编码ATPase的基因ADRV-96L进行了克隆、表达及功能分析,阐明这个虹彩病毒核心基因的功能.[方法]采用PredicProtein软件分析序列,构建重组原核表达质粒pET32a/His ADRV-96L,经IPTG (Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)诱导在大肠杆菌DE3中表达蛋白,用镍树脂纯化和咪唑液洗脱.钼蓝分光光度法检测产生的无机磷(Pi)以确定纯化ADRV-96L的ATPase活性.建立表达蛋白的稳定转染细胞系并进行鉴定,再分别通过绘制病毒的一步生长曲线和评估转染细胞的生长速率来测定该蛋白对病毒复制及细胞生长的影响.[结果]多重序列比对显示ADRV-96L存在含Walker A和Walker B基序的AAA-ATPase (ATPases associated with a variety of cellular activities,与各种细胞活性相关的ATPase)结构域(20-159位氨基酸)及两个高度保守的精氨酸.重组原核质粒表达了含ADRV-96L的52 kD融合蛋白,该蛋白质具有ATPase活性(酶的比活性平均为4.68 U/mg).结果未检出ADRV-96L对病毒的复制影响,但显示该蛋白可促细胞生长.[结论]大鲵蛙病毒96L基因(ADRV-96L)编码一个促细胞增殖和生长的ATPase.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张奇亚	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	60	602	14.0	21.0
5	张锐	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	61	584	15.0	22.0