牦牛CLDN3基因特征分析及FSH对其在睾丸支持细胞表达的影响

• 作者: 何闳翃 余四九 叶小琳 崔燕 李谷月 樊江峰 潘阳阳 王亚营 王萌
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 紧密连接蛋白3基因(CLDN3) 促卵泡素 睾丸支持细胞 紧密连接 牦牛
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 437-446
• 页数: 10页
• 分类号: S823.85
• 字数: 6687字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.03.009

摘要

紧密连接蛋白3(claudin3,CLDN3)可调节小分子穿过睾丸支持细胞(sertoli cell,sc)紧密连接(tight junction,TJ)的运动,为细线前期和细线期精母细胞创造物理屏障.为探索CLDN3基因对牦牛(Bosgrunniens)SC的生物学作用,本研究采用反转录聚合酶联反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法克隆牦牛CLDN3基因,对其进行生物信息学分析,并将不同浓度(0,10,25,50,75和100 ng/mL)的促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)作用于牦牛SC,运用实时荧光定量PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫蛋白印记(western bloting,WB)方法,检测FSH对牦牛SC中CLDN3表达的影响,并采用免疫荧光染色对CLDN3蛋白表达定位检测.结果表明,本研究成功克隆得到1 074 bp含有开放阅读框的牦牛CLDN3 cDNA序列(GenBank No.YK 411920),其中编码区660 bp,编码219氨基酸,经同源性分析发现牦牛与其他物种同源性较高(≥90％);FSH浓度为25ng/mL的处理组与其他组相比其CLDN3 mRNA表达和CLDN3蛋白表达水平最高,且差异极显著(P＜0.01);免疫荧光结果显示SC细胞质、细胞核及细胞膜均有CLDN3表达.综上所述,牦牛CLDN3氨基酸序列在种属间具有保守性,FSH可能为牦牛睾丸形成TJ的重要激素,并以浓度依赖的方式诱导牦牛SC中CLDN3表达,最佳浓度为25 ng/mL.本研究为揭示牦牛精子迁移过程中CLDN3的生物学作用提供科学依据.