变异链球菌clpP基因启动子的克隆及活性测定

• 作者: 侯香华 张世阳 张加勤 洪国粦 赵元勋 郑港森 马晓波 黄朝阳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 变异链球菌 clpP 启动子
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1126-1130
• 页数: 5页
• 分类号: R378.7
• 字数: 4333字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.204

摘要

目的 克隆变异链球菌clpP基因启动子,并进行初步验证.方法 PCR分别扩增变异链球菌clpP基因5'-侧翼序列FclpP及其突变体FclpP-ΔRS,插入β-半乳糖苷酶(β-glucuronidase,gusA)报道基因表达载体pIB107 Bam HI/XhoⅠ酶切位点之间,构建clpP基因5'-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达载体pFclpP和pFclpP-ΔRS,PCR、酶切及测序鉴定;经Bgl Ⅱ线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆,得到clpP基因5'-侧翼序列及其突变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS,经PCR及测序鉴定后,测定SClpP、SClpP-ΔRS、阳性对照SAmi和阴性对照SIB107的GusA活性.结果 成功扩增出变异链球菌clpP基因5'-侧翼序列及其突变体;变异链球菌clpP基因gusA报道基因表达载体经PCR、酶切及测序鉴定正确无误;PCR及测序结果表明成功构建clpP基因5'-侧翼序列及其突变体变异链球菌gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ARS;GusA活性测定证实变异链球菌clpP基因5'-侧翼序列及其变体gusA报道基因表达株SClpP和SClpP-ΔRS的GusA活性分别是阴性对照pIB107的34.6和8.7倍,是阳性对照松鼠葡萄球菌ami基因启动子片段gusA报道基因表达株活性的5.2和1.3倍,提示插入片段FclpP和FclpP-ΔRS具有较强的启动子活性.结论 成功定位并克隆变异链球菌clpP基因启动子,为今后研究clpP基因上游调控序列提供试验和理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄朝阳	厦门大学附属第一医院检验科	38	159	7.0	11.0
2	侯香华	厦门大学附属第一医院肾内科	7	18	2.0	4.0
3	张加勤	厦门大学附属第一医院检验科	22	70	5.0	7.0
5	赵元勋	厦门大学附属第一医院检验科	16	57	5.0	7.0
6	马晓波	厦门大学附属第一医院检验科	41	131	6.0	8.0
9	张世阳	厦门市医院感染管理中心	1	0	0.0	0.0
10	郑港森	厦门大学附属第一医院检验科	16	67	5.0	7.0