变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测

• 作者: 宋秀宇 张加勤 徐巧丽 房丽丽 郑港森 饶慧华 马晓波 黄朝阳 黄珊珊
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 变异链球菌 ldh基因 启动子
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 224-228
• 页数: 5页
• 分类号: R378.1
• 字数: 3901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.03.003

摘要

目的 克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性.方法 以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH Ⅰ/XhoⅠ之间,构建ldh基因启动子gusA报告载体pCKS11,PCR、酶切及测序鉴定;经Sca Ⅰ酶线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆SCKS11,经PCR和测序鉴定后,检测其GusA活性.结果 成功扩增出大小为269 bp的ldh基因候选启动子;经PCR、酶切及测序鉴定,变异链球菌ldh基因候选启动子gusA报告基因表达载体pCKS11构建正确;PCR和测序鉴定,ldh基因候选启动子gusA报告株SCKS11构建成功;变异链球菌ldh基因候选启动子启动的GusA活性是无启动子的阴性对照的5.8倍,是阳性对照变异链球菌clpP基因启动子的0.9倍.结论 成功克隆变异链球菌ldh基因启动子序列,具有较强的启动转录活性,为研究ldh基因的表达调控机制奠定基础.