华山松ISSR反应体系的优化

• 作者: 何德 李翠新
• 来源期刊: 湖北民族学院学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 华山松 ISSR 优化 PCR
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 页码范围: 121-124,155
• 页数: 5页
• 分类号: S722.5
• 字数: 3115字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13501/j.cnki.42-1569/n.2018.06.001

摘要

为获得条带清晰、稳定和多态性高的华山松ISSR扩增结果,对引物、Mg2+浓度和退火温度等因素进行了优化.确定了ISSR分析的最佳PCR条件:15 μL反应体系中,10×PCR buffer反应缓冲液1.5 μL,模板DNA 22.5 ng,Mg2+2.2 mmol/L,dNTPs 0.23 mmol/L,引物0.93 μmol/L,Taq DNA聚合酶0.027 U/μL.PCR反应程序为:经94℃预变性4 min后,经过94℃变性30 s,Tm-4.8℃退火30 s,72℃延伸108 s共33个循环;循环结束后72℃延伸10 min.从44条ISSR引物中筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.对华山松ISSR实验优化体系的建立,为今后利用IS-SR分子标记技术开展华山松种间遗传变异分析和构建遗传图谱等研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李翠新	西南林业大学生命科学学院	25	62	4.0	5.0
2	何德	西南林业大学生命科学学院	33	74	4.0	5.0