羊口疮024基因的表达、多抗制备及亚细胞定位

• 作者: 俞赵荣 崔佣楸 张谦 张高峰 李永东 杨侃侃 王元红 王勇 苏莉 钟灵毓
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 024基因 表达 多克隆抗体 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1117-1121
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201810001

摘要

目的 克隆表达羊口疮病毒(Orf virus,()RFV) 024基因,制备多克隆抗体,检测其免疫原性,并对其进行亚细胞定位分析.方法 根据GenBank中羊口疮病毒024基因序列设计引物,进行PCR扩增.将其亚克隆至表达载体,构建原核重组质粒pGEX-6P-1-024以及真核重组质粒pEGFP-N1-024.将原核重组质粒转化Rosetta (DE3)细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定024蛋白的表达情况.纯化后的024蛋白免疫BALB/c雌鼠,获得血清并制备多克隆抗体,进行Western-blot分析.将构建的真核质粒转染MDBK细胞,24 h后通过免疫荧光观察其在细胞中的表达及亚细胞定位.结果 SDS-PAGE结果表明,羊口疮病毒024基因在Rosetta (DE3)细胞中正确表达,大小为59 kDa.Western-blot结果表明024蛋白能与制备的多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性.荧光显微镜下结果表明024蛋白转染MDBK细胞后主要在细胞质中表达.结论 本实验为后续深入研究()RFV 024基因功能和致病机制奠定了基础.